售前熱線
400-111-0186
(一)準備
1.打開控制器電源、電腦電源后，控制系統(tǒng)自動打開;
2.檢查所有閥門是否關(guān)閉，蓋緊罐蓋上各種蓋帽，旋緊罐蓋上壓緊螺栓;
3.預(yù)先啟動蒸汽發(fā)生器及空氣壓縮機，將控制器中的溫度控制設(shè)置為手動。
4.標定pH、DO電極，將電極插入罐體側(cè)面的傳感器口并及時的鎖緊螺母，確保安裝妥當防止高壓下傳感器彈出傷人。將從罐體傳感器口取下的不銹鋼塞放到指定位置。
5.確定發(fā)酵罐底閥已經(jīng)關(guān)緊，用蠕動泵(普瑞B(yǎng)F200-YZ16或者WL300B-TH16)投入培養(yǎng)基，調(diào)整pH值，加消泡劑。
注：氯離子對不銹鋼會帶來不可逆轉(zhuǎn)的破壞，因此應(yīng)避免用鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH，如工藝上無法避免加鹽酸，應(yīng)控制鹽酸溶液濃度不大于5%且在添加過程中不得直接接觸不銹鋼。
BF200-YZ16 WL300B-TH16
(二)培養(yǎng)基預(yù)熱
1.打開排氣閥，打開夾套冷凝水閥排盡夾套水，關(guān)閉其它閥門。拔掉冷凝器的出水管，以防冷凝器中水受熱膨脹。
2.啟動反應(yīng)器攪拌馬達。調(diào)轉(zhuǎn)速100~200Rpm.(注意：開啟攪拌時，應(yīng)先按下攪拌開關(guān)，再設(shè)置好轉(zhuǎn)速，最后將控制方式改為“自動”)
3.蒸汽進夾套：緩緩打開夾套蒸汽閥蒸汽進夾套(注意：此時有輕微爆破聲屬正常，如聲音過響，則開閥的速度應(yīng)減慢)。待排水總口排出蒸汽時調(diào)節(jié)冷凝水閥，控制蒸汽排出量以有少量蒸汽冒出即可，并控制夾套內(nèi)壓力不超過0.2Mpa。當培養(yǎng)基預(yù)熱至98℃時，進入滅菌操作。在培養(yǎng)基溫度在80~90℃時可以適當?shù)臏p慢升溫速度，在本溫度區(qū)域可以殺滅大部分的微生物。
4.蒸汽進取樣閥:打開出料閥 (關(guān)緊底閥),打開罐底蒸汽閥,蒸汽進入取樣閥內(nèi)腔,當出料閥排盡冷凝水后應(yīng)調(diào)節(jié)其開度,以有少量蒸汽排出即可。
(三)滅菌
1.蒸汽進過濾器：關(guān)閉夾套蒸汽，適當降低攪拌速率，微開過濾器上的兩個排冷凝水閥，打開過濾器前蒸汽閥，緩緩打開空氣管線切斷閥，讓蒸汽進入罐體，當空氣過濾器上兩個冷凝水閥出口冷凝水很少時，調(diào)節(jié)這兩個冷凝水閥以有少量蒸汽排出為宜。當排氣口有蒸汽排出或罐溫到達100℃兩分鐘后，關(guān)閉排氣閥。打開底閥，蒸汽進罐(開閥時觀察視鏡處培養(yǎng)基翻動的變化，以有少量的變化為宜).當罐溫達到100℃以上時,培養(yǎng)基中的溶氧接近零,可以標定溶氧的零點。
2.當達到預(yù)定溫度(121℃)或罐壓，開排氣閥至有蒸汽排出，打開接種閥，打開冷凝水閥，根據(jù)罐壓或罐溫變化的趨勢，及時調(diào)節(jié)蒸汽閥。閥門調(diào)節(jié)宜微調(diào)應(yīng)避免大幅度開關(guān)。當反應(yīng)器罐壓或罐溫維持在預(yù)定的范圍內(nèi)開始計時。
3.保溫開始后，排氣閥蒸汽排量不宜太小，否則可能導(dǎo)致液面以上的罐體部分尤其罐蓋達不到消毒溫度。
4.移種管線消毒(適用于多級發(fā)酵)
在保溫過程中打開移種管線閥及發(fā)酵罐受種閥，保溫結(jié)束前關(guān)閉受種閥和移種管線閥。
(四)滅菌完成及降溫(先開后關(guān)，后開先關(guān))
1.關(guān)閉冷凝水閥，旋緊接種口，旋緊底閥，再關(guān)緊取樣器的蒸汽閥。旋緊出料閥。
2.關(guān)緊夾套蒸汽及夾套排水閥，關(guān)緊空氣管線切斷閥及冷凝水閥，關(guān)緊過濾器前蒸汽閥，全開空氣閥，空氣經(jīng)過濾器進入發(fā)酵罐。
3.當溫度降至90℃以下后，在控制器中將溫度設(shè)定為預(yù)定溫度并將控制方式設(shè)定為“自動”，發(fā)酵罐進入自動降溫。適當調(diào)高攪拌轉(zhuǎn)速。
4.在降溫過程中，始終監(jiān)視罐壓，嚴禁壓力掉零。當溫度到達工藝要求時，調(diào)節(jié)攪拌轉(zhuǎn)速、空氣流量、開空氣進罐底閥，調(diào)整罐壓、標定溶氧電極斜率及校正pH電極的零點。
注意事項：
1.消毒前必須排盡排氣冷凝管中的水;
2.消毒后，空氣應(yīng)緩緩?fù)ㄈ脒^濾器;
3.操作過程中不要面對有蒸汽噴出的管口，以免被燙傷。
(一)準備
1.溶氧電極標定:調(diào)節(jié)空氣流量、罐壓、攪拌轉(zhuǎn)速、罐溫(為了保證工藝參數(shù)的可比性，建議上面四參數(shù)維持一個固定值)，待所有參數(shù)穩(wěn)定后，標定溶氧電極斜率為100%，
2.pH電極零點校正:高溫消毒后pH電極的零點或多或少都會發(fā)生漂移,應(yīng)預(yù)校正。取樣用外源pH電極精確測定培養(yǎng)基的pH值，根據(jù)精確測定值與在線的pH值的差值在標定菜單中直接修改零點，使在線值等同精確測量值。
(二)接種：
1.搖瓶倒種:調(diào)節(jié)進氣量至0.2VVM，開排氣閥至罐壓接近零(不得大于0.02Mpa)，預(yù)先旋松接種口，在接種口處放好酒精棉并點燃，打開接種口，倒入種子，然后旋緊接種蓋，立即調(diào)高罐壓。最后將酒精棉，搖瓶等及時清理掉。
2.
移種管線消毒:檢查受種閥并關(guān)緊,開冷凝水閥，開種子罐出料閥，開移種管線蒸汽閥，開移種管線切斷閥，當管道冷凝水排盡后調(diào)節(jié)冷凝水閥以有少量蒸汽排出為宜。消毒30分鐘后，關(guān)緊冷凝水閥，關(guān)緊蒸汽閥，并立即開受種閥，用發(fā)酵罐中的空氣對移種管線進行保壓。等移種管線冷卻后就可以移種。
差壓移種：調(diào)整種子罐與發(fā)酵罐的壓力，維持種子罐罐壓大于發(fā)酵罐罐壓約0.05Mpa,開種子罐罐底閥，種液進入發(fā)酵罐。移種結(jié)束必須立即關(guān)緊受種閥，并調(diào)高發(fā)酵罐罐壓。移種管線應(yīng)及時用蒸汽清洗，防止堵塞，操作同移種管線的滅菌操作。
3.接種后，開排氣過濾器的冷凝器冷卻水。
(三)發(fā)酵開始前設(shè)定發(fā)酵參數(shù)
1.發(fā)酵初始化：
接種后立即通知項目組長或者管理員，在控制器的發(fā)酵罐狀態(tài)畫面輸入“發(fā)酵批號”，將發(fā)酵開始時間和結(jié)束時間都點擊為當前時間，輸入“發(fā)酵說明”可作為發(fā)酵備忘注解，最后點擊“發(fā)酵”，發(fā)酵數(shù)據(jù)才能自動保存。
2.設(shè)定發(fā)酵過程參數(shù)及適宜的控制模式：
根據(jù)發(fā)酵工藝，設(shè)定具體參數(shù)和控制模式(溫度、pH、轉(zhuǎn)速、消泡控制、補料控制、溶氧與轉(zhuǎn)速關(guān)聯(lián)、溶氧與補料關(guān)聯(lián)、pH與補料關(guān)聯(lián)等)
3.操作人員在控制器的查看、修改等工作結(jié)束后，必須注銷用戶，以防各種原因?qū)е率髽艘苿右鸢l(fā)酵參數(shù)的改變。
(四)補料
1.將經(jīng)滅菌消毒的補料瓶及輸液管放置于擱架上，用手動方式轉(zhuǎn)動蠕動泵泵頭，將輸液管沿蠕動泵轉(zhuǎn)動方向嵌入蠕動泵內(nèi)。并用蠕動泵殼內(nèi)的夾子夾緊軟管。
2.旋下補料口上悶頭，用酒精棉球?qū)ρa料口內(nèi)橡膠塞外表面消毒，然后將針頭插入并穿透密封蓋，并用補料針上的螺母鎖緊。
3.打開蠕動泵手動開關(guān)，使輸液管中充滿料液。置蠕動泵開關(guān)于自動狀態(tài)。根據(jù)發(fā)酵工藝要求設(shè)定控制方式及控制周期和脈沖。
4.酸堿液、消泡劑操作同補料操作，補料方式有多種,應(yīng)根據(jù)工藝要求選用恰當?shù)难a料方式。
同樣補料環(huán)節(jié)可以使用普瑞B(yǎng)F200-YZ16或者WL300B-TH16蠕動泵進行補料和酸堿值的中和操作
(五)取樣
1.取樣器消毒：半開出料閥，開蒸汽閥，，蒸汽進入取樣器，消毒時間5-10分鐘。
2.關(guān)蒸汽閥，全開出料閥，準備取樣。
3.逆時針轉(zhuǎn)動取樣閥手柄，進行取樣。回轉(zhuǎn)手柄，取樣結(jié)束。
4.開蒸汽閥，沖洗取樣器，，關(guān)閉蒸汽閥。取樣結(jié)束。
注意：開啟蒸汽閥的時候，不要面對取樣口，以免蒸汽被噴出的蒸汽燙傷。
(六)放罐
放罐提前通知項目組長或管理員，項目組長將放料是通過底部放料口放料，轉(zhuǎn)動手柄開閥P01即可放料。若需收集無菌料操作同取樣操作。
發(fā)酵結(jié)束：發(fā)酵結(jié)束必須在控制器在控制器的發(fā)酵罐狀態(tài)畫面按“正在發(fā)酵”并“確認”后顯示“發(fā)酵結(jié)束”， 發(fā)酵數(shù)據(jù)將自動整理并保存。
